Zwischen Altstadt und Zitadelle befindet sich die Schleuse Spandau. Sie verbindet die unterschiedlichen Wasserspiegelhöhen der Unteren Havel-Wasserstraße und der Oberen Havel-Wasserstraße und liegt auf dem Hauptverkehrsweg zwischen dem Berliner Zentrum und Stettin. Keine andere Berliner Schleuse wird von so vielen Frachtschiffen genutzt.
Die Kammer ist 115 m lang und 12,5 m breit. Die Fallhöhe beträgt he nach Pegelstand 1,8 bis 2,4 m. Ein Schleusenvorgang dauert knapp 30 Minuten und keine andere Berliner Schleuse wird von so vielen Frachtschiffen genutzt.
Im oberen und unteren Vorhafen bestehen Warteplätze für die Berufs- und Sportschifffahrt. Es gibt auch eine Bootsschleppe.